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共同戰“疫”,共克時艱,執著守護,靜待春暖花開

關注:319 發表時間:2020-03-23 13:39:10

共同戰“疫”,共克時艱

執著守護,靜待春暖花開

    


                                                                                                 核“芯”

春天來了,萬物都在復蘇,我們的對新冠病毒的戰役也在慢慢的迎來了春天,在這次新冠肺炎的戰役中,核酸檢測試劑盒可謂是打贏這場戰役的一把利劍,大放異彩,試劑盒中的探針就是試劑盒的核“芯”內容,今天我們就來看看探針都有哪些種類及特點

探針種類


磷酸化(Phosphorylation)

特點及應用

5'磷酸化可用于接頭,克隆和基因構建以及連接酶催化的連接反應。3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相關實驗中,也用于阻止DNA聚合酶催化的DNA鏈延伸反應。

生物素(Biotin)

特點及應用

引物生物素標記,可用于非放射性免疫分析來檢測蛋白質、胞內化學染色、細胞分離、核酸分離、雜交檢測特異性的DNA/RNA序列、離子通道構象變化等。


地高辛(Digoxigenin)

特點及應用

地高辛標記的探針可用于各種雜交反應,如DNA-DNA雜交(Southern blotting)、DNA-RNA雜交(Northern blotting)、斑點雜交(Dot blotting)、克隆雜交、原位雜交以及酶聯免疫分析(ELISA)。


5'氨基修飾

特點及應用

可方便的用于制備功能化的寡核苷酸,廣泛的應用在DNA芯片(DNA Microarray)和多重標記診斷系統。目前提供5' C6 氨基修飾,可用于連接一些即便靠近寡核苷酸也不會影響其功能的化合物。

3'氨基修飾


特點及應用

目前提供3' C7 氨基修飾。它可用于設計新的診斷探針和反義核苷酸,例如5'端可用高度敏感的32P或熒光素標記的同時3'可用氨基修飾以進行其他的連接。另外3'修飾抗3'外切酶消化從而可用于反義實驗。

巰基(Thiol)

特點及應用

5'-巰基在很多方面與氨基修飾類似。巰基可用于加附各種修飾如熒光標記物和生物素。例如可以在碘乙酸和馬來酰亞胺衍生物存在下來制作巰基連接的熒光探針。5'的巰基修飾主要用5'巰基修飾單體(5'-Thiol-Modifier C6-CE Phosphoramidite 或Thiol-Modifier C6 S-S CE Phosphoramidite)。用5'-Thiol-Modifier C6-CE單體修飾后必須進行硝酸銀氧化以去除保護基(trityl),而Thiol-Modifier C6 S-S CE單體修飾后須用DTT將二硫鍵還原成巰基。

間臂(Spacer)

特點及應用

Spacer 可為寡核苷酸標記提供必要的間隔以減少標記基團與寡核苷酸間的相互作用,主要應用于DNA發夾結構和雙鏈結構研究。C3 spacer 主要用于模仿核糖的3'和5'羥基間的三碳間隔, 或“替代”一個序列中未知的堿基。3'-Spacer C3用于引進一個3'間臂從而阻止3'端外切酶和3'端聚合酶發揮作用。Spacer 18常用于引進一個強疏水基團。


硫代(Phosphorthioate)

特點及應用

硫代修飾的寡核苷酸主要用于反義實驗中防止被核酸酶降解。你可以選擇全硫代,但隨著硫代堿基的增加,寡核苷酸的Tm值會降低,為了降低這種這種影響,可以對引物兩端2-5個堿基進行硫代修飾


脫氧脲嘧啶 (DeoxyUridine,dU)


特點及應用

脫氧脲嘧啶可以插進寡核苷酸來增加雙鏈的熔點溫度從而增長雙鏈的穩定性。每個脫氧胸腺嘧啶被脫氧脲嘧啶替代可以增長雙鏈熔點溫度1.7°C.



脫氧次黃嘌呤(deoxyInosine,dI)

特點及應用

脫氧次黃嘌呤是一個自然存在的堿基,雖然不是真正意義上的通用堿基但當與其它堿基結合時會比其它堿基錯配相對更穩定。脫氧次黃嘌呤與其它堿基的結合能力為dI:dC > dI:dA > dI:dG > dI:dT.在DNA聚合酶的催化下,脫氧次黃嘌呤首選與dC結合。



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